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肺动脉内膜切除标本中的内皮细胞具有高血管生成潜能,并表达高水平的肝细胞生长因子

摘要

背景

假设血管生成受损是慢性血栓栓塞肺动脉高血压(CTEPH)的发育的重要因素。然而,内皮细胞(EC)在CTeph中的作用仍不清楚。本研究的目的是探讨ECS来自肺子宫切除术(豌豆)标本的ECS的血管生成潜力。

方法

我们使用MACS系统从周围型肺癌患者完整的肺动脉中分离出PEA标本(CTEPH-ECs)和对照EC细胞系这些细胞进行体外分析,包括聚合酶链反应阵列分析,并对PEA标本进行免疫组化分析。此外,检测CTEPH患者的血清HGF水平。

后果

三维培养分析显示CTEPH内皮细胞具有高度的血管生成能力。血管生成聚焦基因PCR阵列显示肝细胞生长因子(HGF)的高表达在CTEPH内皮细胞中,从PEA标本提取的上清液中也证实了HGF的高表达。免疫组化分析显示,血栓血管表面有HGF的表达。CTEPH患者的血清HGF水平高于肺血栓栓塞幸存者。

结论

我们的研究表明,在豌豆标本中存在具有促血管生成特性和高表达HGF的内皮细胞。这些结果如何归因于病因尚不清楚。然而,对HGF通路的进一步研究可能为CTEPH患者提供新的诊断和治疗工具。

同行审查报告

背景

慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)是一种肺动脉高压,与未溶解的组织凝块有关,一般认为肺动脉内膜切除术(PEA)是CTEPH治疗的金标准。各种病因,包括感染、炎症、遗传易感性和血管生成不足[1.],已被认为是重要的致病因素[2.].在PEA组织标本中检测到的不良血管生成也意味着CTEPH患者的预后不良[3.].此外,导致血栓延迟分辨率的无序血管生成可能是CTEPH的发展的潜在病因因素[4.].然而,由于报道的调查数量有限,仍有待阐明内皮细胞(ECS)是否参与该疾病的发病机制。

肝细胞生长因子(HGF)及其受体间充质上皮转化因子(Met),最初被发现是促进肝细胞生长和肝再生的有效有丝分裂原[5.,6.]据报道,HGF在血管内皮细胞、心肌细胞和其他类型的细胞中具有多效性功能,包括增殖、血管生成、抗凋亡、抗自噬、抗炎和抗纤维化[7.]然而,HGF-Met信号在CTEPH病因中的确切作用尚不清楚。

在这里,我们希望从HGF的角度来阐明从豌豆标本中采集的ECs的血管生成相关特征。

方法

研究人群

2014年6月至2015年10月接受PEA治疗的CTEPH患者被纳入研究。PEA标本取自Chiba大学医院Ishida博士进行PEA期间的CTEPH患者。CTEPH的诊断过程已在前面描述过[8.].在同一时期,在千叶大学医院从I期周围型肺癌患者的肺叶切除术标本中获得肺动脉。肺癌I期的诊断由胸部增强ct、脑磁共振成像及肺组织的组织学检查证实。手术前无患者接受化疗或放疗,且有明显慢性阻塞性肺疾病或肺纤维化的患者被排除在研究之外。

组织收集

在PEA时,采集了节段性肺动脉中的PEA样本。节段性肺动脉样本约为1.5 从肺叶切除术标本中采集长度为cm的动脉;这些动脉远离原发肿瘤,且未显示肉眼或显微镜下的恶性细胞浸润。收集这些动脉进行原代细胞培养和组织病理学检查,方法与PEA标本相同。

CTEPH ECs和控制ECs的隔离

肺叶切除标本的PEA标本和肺动脉在无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)中清洗,切碎,并在Dulbecco的改良Eagle培养基(DMEM)中培养,其中含有1%牛血清白蛋白、0.2%胶原酶(Wako,东京,日本),10 毫克/毫升脱氧核糖核酸(日本东京和谷),250 毫克/毫升dispase(日本东京罗氏)1小时 H将获得的细胞悬浮液接种到涂有纤维连接蛋白(美国纽约州康宁市康宁)的6厘米皮氏培养皿中,并在内皮生长培养基中培养™-2微血管通讯工具™ (EGM;Lonza,巴塞尔,瑞士)直到它们达到约80%的汇合点(7-10 第37天 摄氏度,含5%一氧化碳2.如前所述,在第一次传代时,使用CD31微球(日本东京Miltenyi Biotec)分离CD31阳性内皮细胞[9].细胞在EGM中孵育,所有实验均使用传代次数少于6次的细胞进行。

免疫细胞化学

细胞在4%多聚甲醛中固定10分钟 分钟,然后用含有2%正常山羊血清的PBS-T(PBS含吐温-20,0.1%)封闭30分钟 min,并在4℃下与一级抗体孵育过夜 °C并带有一个二级抗体1 h,室温下,用4 μg/ml DAPI在PBS中持续5分钟 min,嵌入50%甘油中,用Fluoview FV10i LIV(日本东京奥林巴斯)检查。

细胞生长曲线、通透性测定及三维培养

5 × 10评价增殖潜能4.将内皮细胞接种在6-cm培养皿中。在指定的每一天,对细胞进行胰蛋白酶消化和计数。我们还根据制造商的说明,使用CultreCoat®体外血管通透性分析(Trevigen,Inc.MD,USA)评估了每个内皮细胞系的通透性。Matrigel™ 根据制造商的说明,基底膜基质(美国纽约州康宁市康宁)用于三维培养。其他细节已在前面描述[10].使用图像J软件程序计算微观领域中的总管长度(拍摄尼康Eclipse Ti-S,东京,日本;捕获倍率,×40)(ver。1.48,国家健康机构,贝塞斯达,MD;http://imagej.nih.gov/ij/).

内皮细胞总RNA分离及基于pcr的血管生成相关基因分析

根据制造商的说明,用RNEasy Mini Kit(Qiagen,Tokyo,Japan)从CTeph-EC和对照-EC中提取总RNA。RT2-Profiler™PCR阵列(QIAGEN,东京,日本)用于分析各种生物过程中涉及的聚焦小组的表达。选择人的血管生成(PAHS-024Z)96孔板,其谱系选择血管生成的84个关键基因的表达,以检测CTeph-EC和对照ECS之间基因的差异表达。先前描述了详细方法[9].

HGF对CTEPH内皮细胞增殖的抑制作用及三维培养

为了研究HGF在培养CTEPH-ECs中的抑制作用,我们使用了一种HGF/MET选择性抑制剂tivantinib (Selleck, Houston, TX, USA) [11].与上述检查细胞生长曲线和三维培养实验的研究类似,5 × 104.将CTEPH内皮细胞接种在6厘米长的培养皿中,EGM含有1 μM替凡尼或0.1%二甲基亚砜(载体)。在每个指定的日子,对细胞进行胰蛋白酶消化和计数。此外,5 × 104.CTEPH-ECs种子接种于基质凝胶上™ 含EGM的基膜基质,含1 μM替凡尼或0.1%二甲基亚砜(载体)并在37℃下培养 24摄氏度 h、 如上所述。

豌豆标本和对照肺动脉总RNA分离及基于pcr的血管生成相关基因分析

根据制造商的指示,从豌豆试样和控制肺动脉从豌豆标本和控制肺动脉控制肺动脉,并根据QIANEN,TOKYO,日本)。RT.2.qPCR Primer Assays (Qiagen, Tokyo, Japan)分析HGF等炎症分子的表达情况。

豌豆样品蛋白质提取及Western印迹分析

从组织(PEA标本和肺动脉)中提取和定量蛋白质[12]已经被描述过。蛋白样品(10 μg)在NuPAGE®Novex 10%双- tris凝胶(Invitrogen公司,东京,日本)上分离,转移到硝基纤维素膜(Invitrogen公司,东京,日本)。用5%脱脂奶粉在含0.5%吐温20的PBS中封闭膜1小时,然后用一抗在4°C孵育过夜。用过氧化物酶偶联的二抗在室温下孵育膜1 h。化学发光检测使用LAS-4000 (Fuji Film,东京,日本)。采用Image J软件对印迹进行扫描和密度分析。

免疫组织化学

样品在10%缓冲福尔马林中固定,石蜡切片,切成3 μm厚的薄片。脱脂切片用PBS洗涤,室温下用含2%正常山羊血清的PBS- t封闭30分钟。然后与一抗在4°C过夜,与二抗在室温下孵育1小时。染色切片用4 μg/ml DAPI在PBS中洗涤5分钟,嵌入50%甘油,用Fluoview FV10i-LIV检查。

试剂

免疫细胞术和免疫组织化学中使用了以下抗体(Abs):兔抗血管性血友病因子(因子VIII)(1:200,达科,加利福尼亚州,美国),小鼠抗CD31抗体(1:200,日本东京Abcam),小鼠抗波形蛋白(1:200,达科,加利福尼亚州,美国),小鼠抗结蛋白(1:100,达科,加利福尼亚州,美国),兔抗肝细胞生长因子(HGF)抗体(1:200,日本东京Abcam),兔抗Met抗体(1:200,日本东京Abcam),正常兔IgG同型对照(1:200,研发系统,美国明尼苏达州明尼阿波利斯),山羊抗兔IgG与Alexa-488荧光染料结合(1:200,日本东京Thermofisher Scientific)山羊抗鼠IgG与Alexa-594荧光染料(1:200,日本东京Thermofisher Scientific)结合。这些抗体溶解在PBS-T中。

免疫印迹法中使用了以下抗体:兔抗β肌动蛋白(1:1000,日本东京Biolegend)、兔抗HGF(1:1000,日本东京Abcam)和山羊抗兔IgG HRP结合物(1:1000,日本东京Thermoscitific)。这些抗体用封闭溶液溶解(含0.5%吐温20的PBS中的5%脱脂奶粉)。

血样

在2013年8月至2017年6月进行诊断性右心导管插入术时,从CTEPH患者中采集血清样本。对照血清样本从肺血栓栓塞症(PTE)幸存者中采集,在3年以上的常规医学会诊期间,无肺动脉高压迹象 急性PTE发作数月后,通过酶免疫分析法(LSI Medience Inc;日本东京)测定血清HGF水平。

统计分析

采用RT-PCR技术对PCR阵列数据进行分析2.profiler-PCR阵列数据分析网络化软件程序(https://www.qiagen.com/jp/shop/genes-and-pathways/data-analysis-center-overview-page/),折叠规则表示为平均值和95%置信区间。使用商用软件(GraphPad Prism,6.0.2版,加利福尼亚州圣地亚哥)进行其他统计分析,结果表示为平均值 ± 标准偏差(SD),除非另有说明。血清HGF水平采用Welch t检验和配对t检验进行分析。其他统计分析采用Mann-Whitney检验进行比较。P价值观< 0.05被认为是具有统计学意义的差异。

后果

EC的细胞培养及特性研究

从5例CTEPH患者和3例肺癌患者中分离出内皮细胞(由于成纤维细胞样细胞的污染,我们无法从其他标本中纯化内皮细胞)。免疫细胞化学显示CTEPH内皮细胞和对照内皮细胞对CD31、因子VIII、波形蛋白呈阳性,结蛋白呈阴性(图。1.).

图1
图1

肺内膜剥脱标本(CTEPH-ECs)和人肺动脉(Control-ECs)细胞的免疫细胞化学。CTEPH-ECs和Control-ECs均为VIII因子、CD31、波形蛋白阳性,desmin阴性(DAPI染色[蓝色];Bar = 50 μm)

CTEPH内皮细胞的高增殖和血管生成潜能

在细胞生长曲线分析(第9天;P = 0.035)(图。2.a) 与对照组相比,CTEPH-ECs具有更低的渗透性(P = 0.035)(图。2.b) .在三维培养实验中,CTEPH ECs显示出更大程度的试管形成(图。2.c),与对照ECS相比,总管长度均致统计更长时间(P = 0.035)(图。2.d)。

图2
图2

CTEPH内皮细胞的增殖和血管生成潜能。A.细胞生长曲线显示CTEPH-ECs具有更大的增殖潜力。B每个细胞系的渗透率测定。该值表示为无细胞井的百分比(100%渗透率)。C,D三维培养表明,CTEPH-ECs比Control-ECs产生更多的管

HGF在CTEPH-ECs中的高表达

PCR阵列显示,CTEPH内皮细胞中HGF的RNA表达高于对照内皮细胞(折叠调节22.60,P = 0.016)(图。3.).PCR阵列的全部数据见附加文件1.针对这一结果,我们还通过qPCR分析评估了c-MET、RhoA、STAT3、ROCK1、ROCK2、COX-2的mRNA表达。CTEPH ECs的这些分子的表达略有增加,但无统计学差异(数据未显示)。

图3
图3

CTEPH内皮细胞和对照内皮细胞的PCR阵列分析。与来自血管生成PCR阵列(Qiagen,人类血管生成[PAHS-024Z])的对照内皮细胞相比,CTEPH内皮细胞mRNA表达的折叠调节。表达显著增加或减少的基因(P < 错误条表示95%的置信区间。缩写:ANGPTL4;血管生成素样4,CTGF;结缔组织生长因子,HGF;肝细胞生长因子,MMP14;基质金属肽酶14,SERPINE1;Serpin肽酶抑制剂1(纤溶酶原激活物抑制剂-1),TYMP;胸苷磷酸化酶

HGF和Met的抑制作用体外

在培养基中添加1 μmol/L的tivantinib显著抑制细胞增殖(第7天,P= 0.0079)(图4.a) 并且似乎也抑制了CTEPH内皮细胞的管形成(图。4.b) 。

图4
图4

CTEPH-ECs中HGF/Met信号抑制的评估。A.在6 mm纤维连接蛋白涂层的皮氏培养皿中进行细胞培养,B三维文化。一种选择性HGF/Met抑制剂,tivantinib,抑制细胞增殖,并明显抑制管的形成

体内HGF和Met的表达

PEA标本的免疫组织化学分析显示,HGF及其受体Met在血栓血管表面表达(图。5.a) 而对照肺动脉的内腔很少出现HGF和Met阳性(图。5.b). HGF的mRNA表达在PEA标本中较高,而IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达无显著性上调(图2)。6.a).从PEA标本中提取的蛋白中HGF的表达也高于从对照肺动脉中提取的蛋白(图2)。6.b、 c)。

图5
图5

乳腺癌的免疫组织化学分析(A.)肺动脉内膜切除术标本中的血栓血管(B)控制肺动脉。肺子宫切除术样品的血栓血管的内腔为HGF的阳性并满足。黑条=500μm,白色条=50μm

图6
图6

A.PCR阵列分析比较肺动脉内膜切除组织和对照肺动脉之间HGF和炎性细胞因子的mRNA表达。*:P < 0.05.误差条表示95%置信区间。缩写:HGF;肝细胞生长因子,IL-1β;白细胞介素-1β,IL-6;白细胞介素-6,IL-8;白细胞介素-8,TNF-α;肿瘤坏死因子-α。B从肺动脉内膜切除标本和对照肺动脉中提取的蛋白质的westernblotting。CHGF的条带信号强度表示为与β-肌动蛋白的比率。误差条表示标准偏差。肺动脉内膜切除标本中HGF蛋白的表达高于对照肺动脉

血清HGF水平

从61名额外的CTEPH患者(包括捐献组织的患者)和12名没有肺动脉高压证据的PTE幸存者中收集血清样本。这些患者的特征列于表11.CTEPH组血清HGF水平高于对照组(0.43) ± 0.44对0.25 ± 0.04,P = 0.003)(图。7.a) .在CTEPH组中,血清HGF水平与血流动力学参数(肺动脉压/阻力、心输出量、氧水平和血浆脑钠肽水平)之间没有相关性(数据未显示)。HGF水平1 这23名患者在PEA后一年也进行了检测。血清HGF水平略有下降(PEA前HGF;0.44) ± 0.34 ng/ml,PEA后HGF;0.31 ± 0.28 纳克/毫升,P = 0.013)在PEA之后(图。7.b) ,而PVR显著降低(PVR前;782.2 ± 254.0达因秒厘米−5, PVR后;317.4±132.0 dyne.sec.cm−5,P <  血清HGF水平前后的差异与PVR的改善程度无关(图。7.C)。

表1图中采集血样进行血清HGF分析的患者基本特征7.A.
图7
图7

慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)患者血清HGF水平的变化(N = 61)和无肺动脉高压证据的肺血栓栓塞(PTE)幸存者(对照组,N= 12)。A.CTEPH组血清HGF水平高于对照组(0.43) ± 0.25 纳克/毫升,0.25 ± 0.04 纳克/毫升,P = 0.003).BHGF水平1 这23名患者在PEA后一年也进行了检测。PEA后血清HGF水平略有下降。C血清前后HGF水平的差异与PVR的改善程度无关

此外,在上述26例CTEPH患者和12例PTE幸存者中,测定了与HGF相关的代表性炎症和血管生成分子(IL-1β, TNF-α, VEGF-A, AngiotensinII)的血浆水平。然而,两组患者血浆中这些分子水平无显著差异(附加文件)2.).

讨论

在此,我们发现CTEPH内皮细胞比对照内皮细胞具有更大的增殖和血管生成潜能(图。2.a、 我们还发现,在CTEPH内皮细胞中HGF的表达水平较高(图。3.)抑制HGF作用抑制CTEPH-EC的增殖和血管生成(图。4.)CTEPH内皮细胞的通透性低于对照内皮细胞,这也表明HGF活性较高[13]体外培养CTEPH内皮细胞(图。2.c).体内实验和免疫组化染色显示,在PEA标本的血栓血管腔内HGF表达(图。5.),而RT-PCR和western blotting显示,HGF在PEA标本中的表达高于对照肺动脉(图。6.)我们还证明了Met(HGF受体)在血栓血管表面的表达。在临床研究中,我们发现CTEPH患者的血清HGF浓度高于没有肺动脉高压证据的PTE幸存者(图。7.),尽管血清HGF浓度与EC表型在体外没有相关性,如图所示。2.,3..我们的结果显示,在PEA标本的血栓血管中,存在具有高血管生成潜力的ECs,这至少部分是由自分泌、旁分泌和内分泌HGF-Met信号通路活性增加驱动的(图)。8.).

图8
图8

肺动脉内膜切除标本中血管生成不足的假设病因。有组织血栓中的血管生成不足可能由抗血管生成因子(如KDR、闭式抗血管生成细胞因子等血管生成因子的mRNA表达减少)和促血管生成因子(血浆微粒)之间的复杂冲突组成。在本研究中,血栓血管中发现促血管生成因子(具有高血管生成潜能的内皮细胞)可能代表后者

有一些关于CTEPH患者血管生成受损的基本报道。Alias等人报道血管内皮生长因子受体-2(KDR)与非血栓肺动脉相比,白色血栓中KDR的mRNA表达降低,在静脉血栓的消退中起重要作用[4.]Zabini等人报告称,均质豌豆样本含有几种抑制血管生成的细胞因子[14].另一方面,Belik等报道CTEPH患者的血浆微粒促进了人肺动脉ECs的血管生成[15].这些数据表明,有组织血栓中血管生成不足可能与抗血管生成因子(血管生成因子样KDR和局部抗血管生成细胞因子的mRNA表达减少)和促血管生成因子(血浆微粒)之间的不平衡有关。我们的结果表明,PEA标本中的ECs具有较高的血管生成潜力,这可能反映了促血管生成因子的参与。

VEGF基因治疗以前曾被报道可增强静脉血栓再通和溶解[16,17],KDR的内皮细胞特异性缺失缺少血管血栓形成并抑制血栓形成的分辨率[4.].在临床环境中,发现低水平的血管生成[3.]和少量再通血管[18]PEA样本预测CTEPH患者预后不良。作为上述报告的补充,CTEPH内皮细胞中与HGF相关的高血管生成潜能可能在血栓形成的解决中发挥积极作用。此外,许多临床前研究最近检查了HGF作为促血管生成和心脏保护剂在心肌梗死、心力衰竭和肢体缺血治疗中的应用[7.].结合我们的研究结果,针对性地适当诱导HGF或HGF模拟物(可能导致血管生成)可能对CTEPH患者阻塞性和/或狭窄性肺血管病变的治疗具有积极作用。

我们的病理生物学研究还表明,豌豆标本的内表面很少对CD31呈阳性(另附文件)3.)这可能表明PEA术前新生内膜的大部分内皮细胞层受损。此外,这表明分离的CTEPH内皮细胞可能来源于血栓血管内的微血管内皮细胞,这可能与血栓内表面的内皮细胞不同。如果是这样,促血管生成的内皮细胞可能来自血栓血管内的微血管内皮细胞白色血栓中mRNA的表达可能取决于样本中血栓血管的数量,如果不对同一样本进行病理分析,这很难估计。这一假设可能能够解释我们的结果与Alias等人的结果之间的差异[4.]虽然这是一种推测,如果新内膜在PEA之前受损,受损新内膜的内皮细胞可能具有较低的血管生成潜能,并可能在血栓形成过程中发挥一定作用。

在我们的研究中,豌豆组织中HGF产生的机制是未确定的。据报道,当通过IL-1,IL-6,TNF-α刺激时,HGF由基质细胞分泌[19]并且PEA组织中炎症细胞因子(如IL-6)的水平上调[20.]血清[21]因此,我们假设豌豆标本和血清中的炎性细胞因子可能刺激内皮细胞分泌HGF。然而,在这项研究中,PEA标本中这些炎症细胞因子mRNA没有增加(图。6.a)和血清中的这些蛋白质表达(附加文件2.)尽管HGF蛋白与这些炎症细胞因子之间的关系尚不清楚,但在CTEPH患者中HGF mRNA和蛋白的表达增加已得到证实。推测可能有其他刺激因子代替这些细胞因子产生HGF。

事实上,目前尚不清楚血清HGF表达的增加如何在组织性血栓形成中发挥作用。然而,据报道,静脉血栓形成患者的血清HGF水平升高[22] [23],肺动脉高压[24]以及年龄较大的[25]高血压[26].在这项研究中,我们发现CTEPH患者的血清HGF浓度较高,尽管与PTE幸存者相比年龄较小,收缩压较低,但PEA成功后,手术患者的HGF水平略有下降。目前尚不清楚血清HGF水平升高是否是血栓形成的结果sis本身或与包括肺动脉高压在内的心血管负担有关的其他因素,但进一步的研究可能为我们提供关于PH病因的未知信息。

本研究有几个限制。首先,CTEPH患者和对照受试者的数量非常小,CTEPH-EC和对照EC之间的差异可能不会反映整个疾病病因。另外,关于组织学分析,我们看不到“整个血栓”,而是只有删除标本的一部分。豌豆标本可能存在异质性,这可能引入了选择偏差。其次,与体内ECS相比,体外的传代细胞呈现不同的表型。含有几种生长因子(包括VEGF和FGF)的EGM培养基用于分离ECS;这可能影响了图2中CTeph-ECS的综合PCR阵列分析的结果。3.尤其是与VEGF和FGF相关的分子。第三,内皮细胞与组织血栓中的其他细胞(成纤维细胞、平滑肌细胞和其他细胞)之间可能存在复杂的相互作用,这在内皮细胞单一培养物中是不存在的。在解释我们的结果时,需要考虑这种相互作用。第四,尽管有报道称豌豆标本中存在干细胞样细胞[27],推测这些细胞可能影响血栓血管的生成;这里我们没有研究干细胞样细胞。尽管存在这些局限性,但我们认为,在相同条件下分离的CTEPH-ECs与Control-ECs的详细比较,可能有助于了解疾病的病因,并开发新的靶向治疗方法。

结论

我们的研究结果表明,PEA标本中存在具有促血管生成特性和HGF高表达的内皮细胞。这些结果与慢性血栓栓子形成的关系尚待研究,然而,进一步研究HGF/Met可能提供新的诊断和治疗工具,可用于临床CTEPH患者的治疗。

缩写

CTEPH:

慢性血栓栓塞性肺动脉高压

HGF:

肝细胞生长因子

遇见:

间充质上皮转换因子

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下载参考资料

确认

没有一个

基金

本研究得到了日本厚生劳动省呼吸衰竭研究组(H26难治性疾病-General-076)的研究资助;日本医学研究与发展署(AMED)对肺动脉高压研究组(15ek0109127h0001)的资助;以及科学研究补助金(JSPS KAKENHI第15号补助金) K09210),日本文部科学省。

可用性数据和材料

本研究中使用和/或分析的数据集可根据合理要求从相应作者处获得。

作者信息

隶属关系

作者

贡献

AN和SS构思并设计了研究。IM和VN参与了研究设计。AN进行了研究和统计分析。AN、SS、TJ、IK、TS起草了手稿。IM、VN、GM、IY、NT、KT修改了手稿。所有作者都阅读并批准了手稿。

通讯作者

通信Sakao清一郎

道德声明

道德认可和参与同意

该研究议定书由千叶大学的机构审查委员会批准(批准号353和1248),并从所有参与患者获得书面知情同意书。

同意出版

不适用。

竞争利益

Naito博士是帝人制药有限公司和大野制药有限公司捐赠部门的成员。Sakao博士获得了日本新屋株式会社、葛兰素史克公司、Actelion制药公司和辉瑞公司的演讲荣誉。Tanabe博士是Actelion制药日本公司捐赠部门的成员,曾获得d提交的工作之外,日本新雅谷的赠款、拜耳的个人费用、日本新店新雅谷的个人费用、辉瑞的个人费用、葛兰素史克的个人费用、Actelion Pharmaceuticals Japan的个人费用。Jujo博士是Actelion Pharmaceuticals Japan捐赠部的成员。

出版商说明

亚搏是什么Springer Nature在公布的地图和机构附属机构的管辖权主张方面保持中立。

附加文件

附加文件1:

pcr阵列分析CTEPH-ECs的全部数据。pcr阵列分析的全部数据,比较了CTEPH-ECs和Control-ECs的mRNA表达(图。3.)(docx21kb)

附加文件2:

慢性血栓栓塞肺动脉高血压(CTEPH)患者的代表性炎症和血管生成细胞因子的血清水平(N = 26)和无肺动脉高压证据的肺血栓栓塞(PTE)幸存者(对照组,N = 12) A)白细胞介素-1β,B)肿瘤坏死因子-α,C)血管内皮生长因子-A,D)血管紧张素-2。两组细胞因子水平无显著差异。(PDF 24 kb)

附加文件3:

肺动脉内膜切除术(PEA)标本的CD31染色。A~D):不同CTEPH患者PEA标本中CD31的免疫组化染色。血栓血管CD31明显阳性,而PEA标本的内表面很少CD31阳性 = 1. (PDF 2298KB)

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内藤,坂尾,郎,即时通讯等等。肺动脉内膜切除标本中的内皮细胞具有高血管生成潜能,并表达高水平的肝细胞生长因子。脉冲医学18日,197 (2018). https://doi.org/10.1186/s12890-018-0769-3

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关键词

  • 慢性血栓栓塞性肺动脉高压
  • 肺动脉内膜切除术
  • 内皮细胞
  • 肝细胞生长因子
  • 血管生成